La secuenciación de genomas bacterianos completos ha revelado que el conjunto completo de genes móviles (mobiloma) representa hasta un 25% del genoma bacteriano. A pesar de la gran disponibilidad de datos de secuencias, el análisis funcional de los elementos genéticos móviles (EGMs) rara vez se informa. Por lo tanto, se necesitan protocolos de laboratorio establecidos para investigar la biología de esta parte importante del genoma bacteriano. La conjugación es un mecanismo de transferencia horizontal de genes que permite el intercambio de EGMs entre cepas de la misma o diferente especie bacteriana. En estreptococos y enterococos, los elementos integrativos y conjugativos (ICEs) representan una gran parte del mobiloma. Aquí, describimos un protocolo eficiente y fácil de realizar de apareamiento en placa para la transferencia conjugativa in vitro de ICEs en estreptococos. La transferencia conjugativa se realiza en medios sólidos y la selección de transconjugantes se realiza con un sembrado de múltiples capas. Este protocolo permite la transferencia de grandes elementos genéticos con un tamaño de hasta 81 kb y una frecuencia de transferencia de hasta 6.7 x 10 transconjugantes/células donantes.