Las plantas medicinales han sido exploradas en todo el mundo como alternativas potenciales para la prevención y tratamiento de diferentes enfermedades, incluidas las infecciones virales. Spreng. (Asteraceae) es una especie medicinal nativa ampliamente utilizada en América del Sur. Dada la influencia de factores genéticos y ambientales en la biosíntesis y acumulación de metabolitos secundarios, este estudio tuvo como objetivo evaluar la actividad antiviral in vitro de cuatro poblaciones silvestres de Córdoba, Argentina, y evaluar la variabilidad en su bioactividad y composición química. La citotoxicidad de los extractos de cloroformo, etanol y acuosos de las partes aéreas se evaluó mediante el método de captación de rojo neutro. La actividad antiviral y virucida contra el virus del herpes simple tipo 1 (HSV-1) y el virus del chikungunya (CHIKV) se evaluó a través del ensayo de reducción de unidades formadoras de placas (PFU). Se realizaron análisis fitoquímicos de los extractos utilizando HPLC-ESI-MS/MS. La población de Puesto Pedernera mostró la actividad antiviral más fuerte, con tasas de inhibición del 82% para CHIKV y del 79% contra HSV-1, así como potentes efectos virucidas, reduciendo la formación de PFU en hasta 5 logaritmos para ambos virus. Notablemente, el extracto de etanol exhibió la menor toxicidad y la actividad inhibitoria más fuerte. La población de Villa del Parque fue inactiva. Identificamos 38 metabolitos secundarios, predominantemente ácidos fenólicos (12) y flavonoides (18), en proporciones variables. La delphinidina y la delphinidina-3-glucósido se describen por primera vez en la especie. Se observaron diferencias en los perfiles fitoquímicos entre los tipos de extractos y las poblaciones. Los compuestos fenólicos clave mostraron correlaciones positivas moderadas con las bioactividades evaluadas, enfatizando la complejidad de las propiedades fitoquímicas y las interacciones. Estos resultados destacan el potencial terapéutico de los extractos contra infecciones virales y subrayan la importancia de considerar la fuente geográfica del material vegetal en las evaluaciones de bioactividad.