El carcinoma de células escamosas orales (CCEO) es el cáncer más común de cabeza y cuello. Con el aumento del uso de anticoagulantes, es importante esclarecer sus posibles efectos en la biología tumoral y las interacciones con los quimioterapéuticos. El objetivo del presente estudio fue investigar los efectos de los anticoagulantes en líneas celulares de CCEO y sus interacciones con el fármaco 5-fluorouracilo (5-FU). La proliferación celular se evaluó utilizando un ensayo in vitro MTS en dos líneas celulares humanas de CCEO (H357/H400) y en queratinocitos orales normales (OKF6) tratados con 5-FU (0.2/1/5/10 g/mL), los anticoagulantes convencionales warfarina (1/5/10/20 M) y heparina (5/20/80 U), así como cuatro nuevos anticoagulantes orales, dabigatrán (5/10/20 M), rivaroxabán (5/10/20 M), apixabán (0.1/1/5 g/mL) y edoxabán (5/10/20 M). La migración celular se evaluó a intervalos de 3 horas hasta 18 horas utilizando un ensayo de curación de heridas. Nuestros resultados demuestran claramente, por primera vez, que los anticoagulantes comúnmente prescritos ejercen efectos antiproliferativos in vitro en células de CCEO. Además, el tratamiento con algunos anticoagulantes redujo la migración de las líneas celulares de CCEO. Sin embargo, la mayoría de los anticoagulantes probados redujeron la efectividad del agente quimioterapéutico probado, 5-FU, destacando posibles fallas en el manejo farmacológico actual de estos pacientes. Nuestros hallazgos mostraron la necesidad de la inmediata traducción de esta investigación a modelos animales preclínicos.