Las algas verdes unicelulares contienen 12-13 anhidrasa carbónica (CAs). Durante mucho tiempo, se consideró que las dos CAs alfa estrechamente relacionadas de la membrana periplásmica, CAH1 y CAH2, eran las CAs con la mayor actividad de hidratación de CO. La proteína recombinante alfa-CA CAH3 (rCAH3) del lumen de los tilacoides obtenida en el presente estudio mostró más de tres veces más actividad en comparación con CAH1 y más de 11 veces más en comparación con estudios anteriores con rCAH3. Se observó sostenibilidad a largo plazo de la enzima a pH alcalino (>8), manteniendo la mitad de su actividad a 4 grados C durante hasta 50 días. La termostabilidad de rCAH3 indicó la retención de la actividad a 20 grados C durante una hora a pH 9-10, con una disminución de aproximadamente el 50% a pH 6-7. Sin embargo, la actividad residual de rCAH3 después de la incubación a una temperatura extremadamente alta (75 grados C) durante 15 minutos dio lugar a la formación de un gráfico de doble pico con máximos a pH 6 y 9. La enzima demostró alta sensibilidad a la etoxizolamida y a la acetazolamida en concentraciones nM, a cationes de Zn y Cu en concentraciones de 1 mM, y la L-cisteína pudo inhibir completamente la actividad de CA de rCAH3 a través de la reducción de grupos tiol. La actividad esterasas de rCAH3 se detectó bien con valores comparables a los de la CAII bovina, pero con un máximo a pH 8 en lugar de pH 9, que es lo habitual para la CAII bovina. Los resultados indicaron que CAH3 podría ser la CA más activa y que su papel en la función del aparato fotosintético podría haber sido subestimado en trabajos anteriores.