El dominio de las familias de genes de la función desconocida () asume roles primordiales en las respuestas metabólicas y de estrés de las plantas. Sin embargo, nuestra comprensión de la familia de genes de tabaco () y sus reacciones específicas a metales pesados, sequía y estrés salino siguen siendo limitadas. En la presente investigación, se llevó a cabo un análisis exhaustivo a nivel genómico de la familia de genes utilizando herramientas de bioinformática. Los resultados revelaron un total de 20 miembros en la familia de genes, denominados como . Los análisis filogenéticos indicaron una relación genética más cercana entre los genes y . La examinación de la estructura de los genes y los motivos conservados revelaron una bifurcación en dos Clados principales, alineándose con estudios previos sobre familias de genes de diversas especies de plantas, enfatizando su mecanismo evolutivo altamente conservado en las plantas. La exploración de las regiones promotoras de los genes reveló una gran cantidad de elementos cis-actuantes asociados con estreses abióticos y bióticos, señalización lumínica y fitohormonas. Los eventos de duplicación génica y el análisis de presión de selección revelaron la duplicación segmentaria y una fuerte presión de selección purificadora durante la evolución de los genes. El análisis sinténico indicó un mecanismo evolutivo relativamente conservado de las familias de genes dentro de las dicotiledóneas. El análisis de expresión específico de tejidos sugirió que los miembros de la familia están potencialmente involucrados en el desarrollo de raíces, la formación de órganos florales y la abscisión. Los patrones de expresión y el análisis de qRT-PCR de los genes implicaron las posibles participaciones funcionales de los NtDUF668s en respuesta a múltiples estreses abióticos. Además, el miembro desencadenado por estrés NtDUF668-08 exhibió una localización nuclear específica. En conclusión, este análisis a nivel genómico ilumina la composición, las relaciones filogenéticas y los roles potenciales de la familia de genes en respuestas al estrés abiótico. Los genes candidatos identificados, en particular , merecen una mayor investigación para su estudio funcional.