Aislamiento, caracterización y análisis proteómico de vesículas extracelulares crudas y purificadas extraídas de f. sp
Autores: Ahmad, Mudassar; Liu, Yushan; Huang, Shiyi; Huo, Yile; Yi, Ganjun; Liu, Chongfei; Jamil, Wajeeha; Yang, Xiaofang; Zhang, Wei; Li, Yuqing; Xiang, Dandan; Huoqing, Huang; Liu, Siwen; Wang, Wei; Li, Chunyu
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2024
Acceso abierto
Artículo científico
2024
Aislamiento, caracterización y análisis proteómico de vesículas extracelulares crudas y purificadas extraídas de f. sp
Categoría
Ciencias Agrícolas y Biológicas
Subcategoría
Botánica
Palabras clave
Vesículas extracelulares
EVs
Patogenicidad
Perfiles proteómicos
Purificación
Hojas de plátano
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 10
Citaciones: Sin citaciones
Los vesículos extracelulares (EVs) producidos por f. sp. () juegan roles vitales en las interacciones planta-patógeno; sin embargo, la isolación de EVs TR4 purificados y sus perfiles de patogenicidad y proteómica no están bien estudiados. Este estudio tiene como objetivo aislar y caracterizar EVs TR4 purificados y comparar sus efectos patogénicos y perfiles de proteínas con los EVs TR4 crudos. Los EVs TR4 fueron aislados utilizando ultracentrifugación y purificados por centrifugación en gradiente de iodixanol. Después de la caracterización y evaluación de los efectos de patogenicidad en hojas de plátano, se realizó un ensayo de proteómica mediante LC-MS/MS. Los resultados indicaron que los EVs de la Fracción 2 exhibieron estructuras esféricas más claras (TEM), abundancia excesiva (1.70 x 10 partículas/mL), mayor intensidad (400 a.u), tamaño medio (154.5 nm), contenido proteico moderado (333.16 ng/uL) y perfil proteico (25-77 kDa), que fueron superiores a las Fracciones 1, 3 y los EVs crudos. Los EVs crudos mostraron una interferencia de fondo significativa con las estructuras de EV (TEM), la mayor abundancia (2.11 x 10 partículas/mL), menor intensidad (7.0 a.u), mayor contenido proteico (528.33 ng/uL) y proteínas de mayor peso molecular (55-70 kDa) en comparación con los EVs en gradiente. Se observó un efecto de biocontrol no significativo de los EVs Foc sobre el crecimiento de esporas TR4. Los ensayos de patogenicidad revelaron que los EVs crudos causaron las lesiones más grandes (2.805 cm), mientras que la Fracción 2 (1.386 cm) y la Fracción 3 (1.255 cm) resultaron en lesiones moderadas en las hojas de plátano. El análisis proteómico identificó 807 proteínas únicas en la Fracción 2, enriquecidas en vías relacionadas con el tráfico y señalización de EV. En comparación, los EVs crudos contenían 179 proteínas únicas no EV relacionadas con el metabolismo y metabolitos secundarios, lo que indica que las proteínas no EV de los EVs crudos también influyen en la patogenicidad observada en las hojas de plátano. Este estudio enfatiza la importancia de la purificación de EV, siendo la Fracción 2 un enfoque crítico para futuras investigaciones sobre la patogenicidad de los EV.
Descripción
Los vesículos extracelulares (EVs) producidos por f. sp. () juegan roles vitales en las interacciones planta-patógeno; sin embargo, la isolación de EVs TR4 purificados y sus perfiles de patogenicidad y proteómica no están bien estudiados. Este estudio tiene como objetivo aislar y caracterizar EVs TR4 purificados y comparar sus efectos patogénicos y perfiles de proteínas con los EVs TR4 crudos. Los EVs TR4 fueron aislados utilizando ultracentrifugación y purificados por centrifugación en gradiente de iodixanol. Después de la caracterización y evaluación de los efectos de patogenicidad en hojas de plátano, se realizó un ensayo de proteómica mediante LC-MS/MS. Los resultados indicaron que los EVs de la Fracción 2 exhibieron estructuras esféricas más claras (TEM), abundancia excesiva (1.70 x 10 partículas/mL), mayor intensidad (400 a.u), tamaño medio (154.5 nm), contenido proteico moderado (333.16 ng/uL) y perfil proteico (25-77 kDa), que fueron superiores a las Fracciones 1, 3 y los EVs crudos. Los EVs crudos mostraron una interferencia de fondo significativa con las estructuras de EV (TEM), la mayor abundancia (2.11 x 10 partículas/mL), menor intensidad (7.0 a.u), mayor contenido proteico (528.33 ng/uL) y proteínas de mayor peso molecular (55-70 kDa) en comparación con los EVs en gradiente. Se observó un efecto de biocontrol no significativo de los EVs Foc sobre el crecimiento de esporas TR4. Los ensayos de patogenicidad revelaron que los EVs crudos causaron las lesiones más grandes (2.805 cm), mientras que la Fracción 2 (1.386 cm) y la Fracción 3 (1.255 cm) resultaron en lesiones moderadas en las hojas de plátano. El análisis proteómico identificó 807 proteínas únicas en la Fracción 2, enriquecidas en vías relacionadas con el tráfico y señalización de EV. En comparación, los EVs crudos contenían 179 proteínas únicas no EV relacionadas con el metabolismo y metabolitos secundarios, lo que indica que las proteínas no EV de los EVs crudos también influyen en la patogenicidad observada en las hojas de plátano. Este estudio enfatiza la importancia de la purificación de EV, siendo la Fracción 2 un enfoque crítico para futuras investigaciones sobre la patogenicidad de los EV.