La tecnología de RNA-Seq se utilizó para seleccionar los genes clave que afectan el desarrollo temprano de los testículos de lechones Duroc x Landrace x Yorkshire, para determinar la vía reguladora y proporcionar referencia para investigaciones posteriores sobre rendimiento reproductivo, cría y otras prácticas de producción. Este estudio seleccionó lechones Duroc x Landrace x Yorkshire de 14 días como animales de prueba. Los testículos de lechones con pesos similares y sin cambios patológicos se dividieron en grupos de testículo pequeño (ST) y testículo grande (LT), y se realizó el análisis de RNA-Seq de genes expresados diferencialmente (DEGs) para encontrar genes candidatos y vías reguladoras relacionadas con el desarrollo testicular temprano. Los resultados muestran que se encontraron 570 DEGs en los grupos ST y LT, con 281 regulados al alza y 289 regulados a la baja. Los DEGs se enriquecieron principalmente en 47 elementos funcionales de ontología genética (GO). El análisis de enriquecimiento de la enciclopedia de genes y genotipos de Kyoto (KEGG) encontró que había 44 vías de señalización KEGG significativamente enriquecidas, y la regulación del desarrollo testicular se centró principalmente en el metabolismo del ácido araquidónico, la vía de señalización Wnt y las vías de secreción de GnRH. Se encontró que los genes , , , , , , y estaban estrechamente relacionados con el desarrollo testicular de estos lechones Duroc x Landrace x Yorkshire, y la expresión diferencial de genes fue consistente con los resultados de validación de PCR cuantitativa en tiempo real (real-time qRT-PCR). Este estudio fue validado por análisis de secuenciación de alto rendimiento y real-time qRT-PCR, y mostró que los genes , , , , , , y pueden estar involucrados en la regulación del desarrollo de células germinales, la espermatogénesis y los rasgos del semen. Estos deberían ser estudiados más a fondo como genes candidatos para el desarrollo testicular temprano y la regulación de rasgos reproductivos en verracos.