Las mejoras en la alimentación de los terneros son de creciente importancia para el desarrollo de la industria láctea. Si bien el calostro es esencial para la salud de los terneros recién nacidos, falta conocimiento sobre las alteraciones en la fosforilación de proteínas en terneros neonatales que son alimentados con calostro o leche madura. Aquí, se recolectaron muestras de tejido del yeyuno medio de terneros que recibieron calostro o leche. Posteriormente, se analizó el fosfoproteoma del yeyuno utilizando un método de enriquecimiento de fosfopeptidos, es decir, cromatografía de afinidad por iones metálicos inmovilizados en titanio, acoplada a cromatografía líquida-espectrometría de masas en tándem. Se identificaron un total de 2093 fosfopeptidos que portaban 1851 sitios de fosforilación únicos correspondientes a 1180 fosfoproteínas. De las 1180 fosfoproteínas, 314 sitios de fosforilación en 241 proteínas se expresaron diferencialmente entre los grupos. El análisis de ontología genética indicó que las fosfoproteínas estaban fuertemente asociadas con procesos de desarrollo y metabolismo de macromoléculas, transducción de señales y respuestas a estímulos e insulina. El análisis de vías mostró que las vías de señalización del spliceosoma, Hippo, insulina y neurotrofinas estaban enriquecidas. Estos resultados revelan el patrón de expresión y los cambios en la función de las fosfoproteínas en los tejidos del yeyuno bovino bajo diferentes condiciones de alimentación y proporcionan más información sobre el papel crucial de la alimentación con calostro durante las primeras etapas de la vida.