El objetivo de este estudio fue investigar la caracterización molecular de las fracciones de materia orgánica del suelo (sustancias húmicas (HS): ácidos fúlvicos-FAs, ácidos húmicos-HAs y huminas-HNs), que son los componentes del suelo más reactivos. Se aplicaron una amplia gama de métodos espectroscópicos (UV-VIS y VIS-nearIR), así como electroquímicos (potencial zeta, diámetro de tamaño de partícula e índice de polidispersidad) para encontrar las diferencias relevantes en el comportamiento, formación, composición y propiedades de sorción de las fracciones de HS derivadas de diversos suelos. El material del suelo (n = 30) utilizado para el estudio se muestreó en la capa superficial (0-30 cm) de suelos agrícolas. FAs y HAs se aislaron mediante extracción secuencial en soluciones alcalinas y ácidas, de acuerdo con el método de la Sociedad Internacional de Sustancias Húmicas, mientras que HNs se determinó en el residuo del suelo (después de la extracción de FAs y HAs) mediante digestión de la fracción mineral utilizando una mezcla de 0.1M HCL/0.3M HF y DMSO. Nuestro estudio mostró que ocurrieron diferencias significativas en las estructuras moleculares de FAs, Has y HNs. El análisis óptico confirmó el menor peso molecular de FAs con una alta cantidad de compuestos similares a la lignina y la estructura alifático-aromática más pesada de HAs. Las HNs se caracterizaron por una estructura muy pronunciada y fuerte asociada con el mayor peso molecular. Las moléculas de HAs y HNs exhibieron una abundancia de grupos funcionales ácidos, fenólicos y aminas en el anillo aromático y las cadenas alifáticas, mientras que las FAs mostraron principalmente la presencia de grupos reactivos de metilo, metileno, etenilo y carboxilo. Las HS se caracterizaron por una alta polidispersidad relacionada con su estructura. Las FAs se caracterizaron por su forma elipsoidal al estar asociadas a las largas cadenas alifáticas, mientras que las HAs y HNs revelaron un diámetro de partícula más pequeño y una forma más esférica causada por la mayor fuerza intermolecular entre las partículas. Las tendencias observadas indican directamente que las fracciones individuales de HS difieren en comportamiento, formación, composición y propiedades de sorción, lo que refleja su potencial de unión a otras moléculas dependiendo de las propiedades del suelo resultantes de su tipo. Las propiedades determinadas de las fracciones individuales de HS se presentan como características promediadas sobre los suelos examinados con diferentes propiedades fisicoquímicas.