En las plantas, los factores de transcripción WRKY juegan un papel crucial en el crecimiento, desarrollo y respuesta a estrés abiótico y biótico. El frijol de ojo negro es un cultivo de legumbre importante. Sin embargo, la marchitez por Fusarium del frijol de ojo negro (CFW), causada por Fot, representa una amenaza seria para su producción. En este estudio, identificamos sistemáticamente miembros de la familia de genes WRKY del frijol de ojo negro (VuWRKY) y analizamos sus patrones de expresión bajo estrés por CFW. Se identificaron un total de 91 factores de transcripción WRKY en el genoma del frijol de ojo negro. Los análisis filogenéticos y de sinencia indicaron que la expansión de los genes VuWRKY en el frijol de ojo negro se debe principalmente a eventos de duplicación recientes. El análisis del transcriptoma del frijol de ojo negro inoculado reveló 31 genes VuWRKY expresados diferencialmente, subrayando su papel en la respuesta a la infección por CFW. Se seleccionaron cuatro genes WRKY expresados diferencialmente para validación. Los ensayos de localización subcelular y Western blot mostraron su localización nuclear y expresión normal. Además, los ensayos de levadura de un solo híbrido demostraron que VuWRKY2 puede unirse a la región promotora del gen Catalasa (CAT), indicando su posible papel en la regulación transcripcional. Este estudio establece una base para la exploración adicional del papel y los mecanismos regulatorios de los genes VuWRKY en respuesta al estrés por CFW.