El mijo cola de zorro, un cultivo cereal vital en China, sirve tanto como alimento básico como fuente de forraje, pero está amenazado por la enfermedad de la roya causada por, lo que lleva a pérdidas severas en rendimiento y calidad. La familia de factores de transcripción NAM, ATAF1/2 y CUC2 (NAC) representa una de las familias de genes reguladores específicos de plantas más grandes, desempeñando roles fundamentales en el desarrollo y las respuestas al estrés. Sin embargo, la relevancia funcional de los genes NAC en la defensa del mijo cola de zorro contra este patógeno sigue sin explorarse. Aquí, analizamos sistemáticamente 33 genes del genoma del mijo cola de zorro. El análisis filogenético clasificó estos genes en 11 subgrupos, mientras que el mapeo cromosómico los localizó en nueve cromosomas de manera desigual. El análisis de promotores identificó elementos relacionados con el estrés y las hormonas vegetales, sugiriendo diversidad funcional. El análisis de perfiles de expresión mostró que la mayoría de los genes exhiben patrones de expresión específicos de tejido. Los resultados de la PCR cuantitativa en tiempo real (qRT-PCR) indicaron que 30 genes respondieron a la infección, con 17 mostrando una fuerte asociación con la resistencia a la roya. Tres genes asociados a la resistencia demostraron actividad de transactivación y localización nuclear, indicando su función reguladora en las respuestas de defensa. Este estudio proporciona tanto conocimientos mecánicos sobre la resistencia a la roya mediada por NAC como posibles objetivos para la mejora molecular en el mijo cola de zorro.