El objetivo del presente estudio es evaluar el contenido absoluto y los patrones de acumulación de componentes flavonoides; para dar una idea de las relaciones de acumulación entre los componentes flavonoides; para explorar la correlación entre el contenido de componentes flavonoides y la expresión de genes de biosíntesis de flavonoides en semillas de alforfón de Tartaria; y para construir una vía biosintética sobre los principales componentes flavonoides en semillas de alforfón de Tartaria. En total, se cuantificaron absolutamente 61 componentes flavonoides en cinco variedades de alforfón de Tartaria, de los cuales 41 existían en todas las variedades. El contenido de la mayoría de los flavonoides variaba significativamente entre diferentes variedades o dentro de la misma variedad. La rutina, la quercetina, la nicotiflorina y el kaempferol fueron los componentes flavonoides dominantes en las semillas de alforfón de Tartaria, representando el 73,05-81,79% del total de flavonoides. Se encontraron correlaciones significativamente positivas o negativas con la acumulación de contenido entre algunos componentes flavonoides. Treinta y seis componentes flavonoides mostraron cuatro patrones de acumulación diferentes en el desarrollo de las semillas de alforfón de Tartaria. Diecisiete genes estructurales para la biosíntesis de flavonoides mostraron una correlación significativamente positiva con la acumulación de la mayoría de los componentes flavonoides durante el desarrollo de las semillas de alforfón de Tartaria, y el gen podría ser el contribuyente más crucial para determinar el contenido total de flavonoides en las semillas de alforfón de Tartaria. Se construyó un esquema de las vías de biosíntesis para 30 flavonoides principales en semillas de alforfón de Tartaria. Estos hallazgos proporcionan una perspectiva de los componentes flavonoides y su biosíntesis en las semillas de alforfón de Tartaria y tienen aplicaciones potenciales en la cría de nuevas variedades con mayores contenidos de flavonoides.