Uso de -GONAD para el análisis sistemático y específico de tipo celular de factores de transcripción del desarrollo en vivo
Autores: Wiegreffe, Christoph; Ehricke, Simon; Schmid, Luisa; Andratschke, Jacqueline; Britsch, Stefan
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2023
Acceso abierto
Artículo científico
2023
Uso de -GONAD para el análisis sistemático y específico de tipo celular de factores de transcripción del desarrollo en vivo
Categoría
Ciencias Naturales y Subdisciplinas
Subcategoría
Biología
Palabras clave
Factores de transcripción
Expresión génica
Unión al ADN
Complejos de remodelación de la cromatina
Específicos de tipo celular
Unión al ADN a nivel del genoma
Licencia
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Citaciones: Sin citaciones
Los factores de transcripción (TFs) regulan la expresión génica mediante la unión directa al ADN junto con cofactores y en complejos de remodelación de la cromatina. Su función se regula de manera espaciotemporal y específica del tipo celular. Para analizar las funciones de los TFs en un contexto específico del tipo celular, se requiere la unión al ADN a nivel del genoma, así como la identificación de proteínas interactivas. Utilizamos -GONAD (edición genética mejorada a través de la entrega de ácidos nucleicos oviductales) en ratones para modificar genéticamente los TFs añadiendo etiquetas de reportero fluorescentes y de afinidad que pueden ser explotadas para la imagen y enriquecimiento de células objetivo, así como para ensayos de inmunoprecipitación de cromatina y pull-down. Como prueba de concepto, mostramos la modificación genética funcional de los TFs de desarrollo estrechamente relacionados, y , en tipos celulares definidos de ratones recién nacidos. -GONAD es un procedimiento altamente eficiente para modificar genes que codifican TFs a través de la integración de pequeñas inserciones, como etiquetas de reportero y de afinidad. Las nuevas líneas de ratón, descritas en este estudio, se utilizarán para mejorar nuestra comprensión de la función de la familia Bcl11 en el neurodesarrollo y enfermedades asociadas.
Descripción
Los factores de transcripción (TFs) regulan la expresión génica mediante la unión directa al ADN junto con cofactores y en complejos de remodelación de la cromatina. Su función se regula de manera espaciotemporal y específica del tipo celular. Para analizar las funciones de los TFs en un contexto específico del tipo celular, se requiere la unión al ADN a nivel del genoma, así como la identificación de proteínas interactivas. Utilizamos -GONAD (edición genética mejorada a través de la entrega de ácidos nucleicos oviductales) en ratones para modificar genéticamente los TFs añadiendo etiquetas de reportero fluorescentes y de afinidad que pueden ser explotadas para la imagen y enriquecimiento de células objetivo, así como para ensayos de inmunoprecipitación de cromatina y pull-down. Como prueba de concepto, mostramos la modificación genética funcional de los TFs de desarrollo estrechamente relacionados, y , en tipos celulares definidos de ratones recién nacidos. -GONAD es un procedimiento altamente eficiente para modificar genes que codifican TFs a través de la integración de pequeñas inserciones, como etiquetas de reportero y de afinidad. Las nuevas líneas de ratón, descritas en este estudio, se utilizarán para mejorar nuestra comprensión de la función de la familia Bcl11 en el neurodesarrollo y enfermedades asociadas.