Se presentan análisis citogenéticos de la ubicación de los ADN ribosómicos 18S y 5S, y la composición de bases de los cromosomas B de Iheringichthys labrosus del río Tibagi, Paraná, Brasil. Se observaron AgNOR en la posición terminal del brazo largo de un par de cromosomas subtelocéntricos. Se observó tinción positiva para CMA3 en algunos cromosomas, que además de estar asociados con NOR, fueron todos negativos para DAPI. El cromosoma B mostró una intensa fluorescencia con CMA3. El uso concomitante de sondas de ADNr 18S y 5S mediante la técnica FISH reveló cistrones ribosómicos 18S en un par de cromosomas subtelocéntricos, en el brazo largo en posición terminal, coincidiendo con el AgNOR. Los sitios 5S se encontraron en otro par subtelocéntrico, en el brazo largo de la región intersticial, cerca del centrómero. Los hallazgos del presente estudio sugieren que, si bien existen algunas características citogenéticas más conservadas, las poblaciones de I. labrosus pueden presentar características propias.