La exposición a pesticidas representa una amenaza significativa para la fertilidad masculina al comprometer células cruciales involucradas en la espermatogénesis. El aminocarb es un insecticida carbamato de uso generalizado, aunque sus efectos perjudiciales en el sistema reproductivo masculino, especialmente en las células sustentaculares de Sertoli, fundamentales para la espermatogénesis, siguen siendo poco comprendidos. En este estudio, investigamos los efectos de concentraciones crecientes de aminocarb en una línea celular de Sertoli de ratón, TM4. Las evaluaciones incluyeron análisis citotóxicos, biogénesis mitocondrial y potencial de membrana, expresión de proteínas apoptóticas, actividad de caspasa-3 y evaluación del estrés oxidativo. Nuestros hallazgos revelaron una reducción dependiente de la dosis en la proliferación y viabilidad de las células TM4 tras la exposición a concentraciones crecientes de aminocarb. Notablemente, la exposición a 5 M de aminocarb indujo la despolarización del potencial de membrana mitocondrial y una disminución significativa en la relación de eIF2alpha fosforilado a eIF2alpha total, sugiriendo un aumento del estrés en el retículo endoplásmico a través de la activación de la vía de eIF2alpha. Además, se demostró que la misma concentración de aminocarb aumentaba tanto los niveles de proteína caspasa-3 como su actividad, indicando una inducción apoptótica. En conjunto, nuestros resultados demuestran que el aminocarb actúa como un inductor apoptótico para las células sustentaculares de Sertoli de ratón in vitro, sugiriendo su potencial para modular vías independientes de la cascada apoptótica. Estos hallazgos subrayan el impacto perjudicial del aminocarb en el rendimiento espermatogénico y la fertilidad masculina, destacando la urgente necesidad de investigar más a fondo sus mecanismos de acción y estrategias de mitigación para salvaguardar la fertilidad masculina.