En este estudio, aislamos y caracterizamos cepas bacterianas de sedimentos de permafrost antiguo (Neógeno) que estuvieron permanentemente congelados durante 3.5 millones de años. El sitio de muestreo se ubicó en Mammoth Mountain en el valle del río Aldan en la Yakutia Central en Siberia Oriental. El análisis de ácidos grasos fosfolipídicos (PLFA) demostró la dominancia de bacterias sobre hongos; el análisis de ácidos grasos específicos para bacterias Gram-positivas y Gram-negativas reveló una cantidad aproximadamente dos veces mayor de bacterias Gram-negativas en comparación con las Gram-positivas. Los conteos microbianos directos después del enriquecimiento natural del permafrost mostraron la presencia de (4.7 +/- 1.5) x 10 células g de masa seca de sedimento. Se encontraron bacterias heterotróficas viables a 0 grados C, 10 grados C y 25 grados C, pero no a 37 grados C. No se detectaron bacterias formadoras de esporas. Los números de hongos viables fueron bajos y solo se detectaron a 0 grados C y 10 grados C. Se identificaron aislamientos bacterianos cultivables seleccionados como representantes de , y . Se caracterizaron representantes de cada una de estas especies en relación con su rango de temperatura de crecimiento, su capacidad para crecer en diferentes medios, para producir enzimas, para crecer en presencia de NaCl, antibióticos y metales pesados, y para degradar hidrocarburos. Todas las cepas pudieron crecer a -5 grados C; el límite superior de temperatura para el crecimiento en cultivo líquido fue de 25 grados C o 30 grados C. La sensibilidad a medios ricos, antibióticos, metales pesados y sal aumentó cuando la temperatura disminuyó (20 grados C > 10 grados C > 1 grado C). A pesar de la actividad ligninolítica de algunas cepas, no se detectó actividad de biodegradación.