En este artículo, presentamos varios protocolos que describen los pasos desde la clonación y obtención de una gran cantidad de ADN plasmídico puro hasta la generación de lentivirus basados en estos constructos. Los protocolos han sido desarrollados en cultivos celulares humanos HEK293T pero pueden adaptarse a otros cultivos celulares. Este protocolo fue diseñado para ser simple de ejecutar y económico, ya que solo requiere materiales y consumibles ampliamente disponibles en laboratorios moleculares, como sales, alcoholes, etc., y no se necesita equipamiento de laboratorio complicado. Estos protocolos son altamente efectivos y pueden llevarse a cabo en cualquier laboratorio estándar de biología molecular.