Aislamiento de leucocitos vivos de músculos inflamatorios humanos
Autores: Coudert, Jerome D.; McLeish, Emily; Sooda, Anuradha; Slater, Nataliya; Beer, Kelly; Paramalingam, Shereen; Lamont, Phillipa J.; Needham, Merrilee
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2021
Acceso abierto
Artículo científico
2021
Aislamiento de leucocitos vivos de músculos inflamatorios humanos
Categoría
Ingeniería y Tecnología
Subcategoría
Bioingeniería
Palabras clave
Miositis inflamatorias
Células inmunes
Biopsia muscular
Leucocitos vivos
Digestión enzimática
Centrifugación en gradiente de densidad
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 25
Citaciones: Sin citaciones
En las miopatías inflamatorias, las células inmunitarias auto-reactivas involucradas en la agresión muscular han sido estudiadas principalmente mediante evaluación histológica de secciones de biopsias musculares; esta metodología proporciona la ventaja de visualizar e identificar células dentro del tejido, pero no permite una investigación más profunda. Para acceder a células vivas y aisladas, muchos estudios utilizaron muestras de sangre; sin embargo, en ausencia de herramientas biológicas para discriminar los leucocitos asociados con el proceso autoinmune de aquellos que surgieron de respuestas contra patógenos, la información observada en las células inmunitarias circulantes a menudo carece de especificidad, y por lo tanto la interpretación de los resultados puede resultar difícil. Con el fin de recuperar selectivamente las células inmunitarias auto-reactivas, desarrollamos un protocolo para aislar leucocitos vivos de biopsias musculares humanas, lo que permite un análisis adicional utilizando una amplia gama de metodologías. El protocolo utiliza digestión enzimática para liberar leucocitos vivos de muestras de músculo esquelético recién recolectadas, seguido de filtración y separación de los leucocitos de los miocitos mediante centrifugación en gradiente de densidad. Las células aisladas pueden ser sometidas inmediatamente a diversas estrategias de análisis para caracterizar ex vivo los mecanismos celulares y moleculares específicos responsables de la agresión muscular autoinmune dirigida o pueden ser colocadas en cultivo para su expansión.
Descripción
En las miopatías inflamatorias, las células inmunitarias auto-reactivas involucradas en la agresión muscular han sido estudiadas principalmente mediante evaluación histológica de secciones de biopsias musculares; esta metodología proporciona la ventaja de visualizar e identificar células dentro del tejido, pero no permite una investigación más profunda. Para acceder a células vivas y aisladas, muchos estudios utilizaron muestras de sangre; sin embargo, en ausencia de herramientas biológicas para discriminar los leucocitos asociados con el proceso autoinmune de aquellos que surgieron de respuestas contra patógenos, la información observada en las células inmunitarias circulantes a menudo carece de especificidad, y por lo tanto la interpretación de los resultados puede resultar difícil. Con el fin de recuperar selectivamente las células inmunitarias auto-reactivas, desarrollamos un protocolo para aislar leucocitos vivos de biopsias musculares humanas, lo que permite un análisis adicional utilizando una amplia gama de metodologías. El protocolo utiliza digestión enzimática para liberar leucocitos vivos de muestras de músculo esquelético recién recolectadas, seguido de filtración y separación de los leucocitos de los miocitos mediante centrifugación en gradiente de densidad. Las células aisladas pueden ser sometidas inmediatamente a diversas estrategias de análisis para caracterizar ex vivo los mecanismos celulares y moleculares específicos responsables de la agresión muscular autoinmune dirigida o pueden ser colocadas en cultivo para su expansión.