Microdisección láser de tipos de tejido específicos de la base del tallo de microesquejes de olivo para la aislamiento de ARN de alta calidad
Autores: Velada, Isabel; Menéndez, Esther; Teixeira, Rita Teresa; Cardoso, Hélia; Peixe, Augusto
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2021
Acceso abierto
Artículo científico
2021
Microdisección láser de tipos de tejido específicos de la base del tallo de microesquejes de olivo para la aislamiento de ARN de alta calidad
Categoría
Ciencias Naturales y Subdisciplinas
Subcategoría
Biología
Palabras clave
Plantas
Tejido
Tipos de células
Perfiles de expresión génica
Microdisección láser
ARN
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 17
Citaciones: Sin citaciones
Las plantas superiores están compuestas por diferentes tipos de tejidos y células. Las células distintas albergan diferentes procesos bioquímicos y fisiológicos, lo que se refleja en las diferencias en los perfiles de expresión génica, niveles de proteínas y metabolitos. Cuando se llevan a cabo estudios ómicos, la información proporcionada por un tipo celular específico puede diluirse y/o enmascararse al utilizar una mezcla de células distintas. Así, los estudios realizados a nivel de tipo celular y de tejido están ganando un interés creciente. La tecnología de microdisección láser (LM) se ha utilizado para aislar tipos específicos de tejidos y células. Sin embargo, esta tecnología enfrenta algunos desafíos dependiendo de la especie de planta y el tipo de tejido bajo análisis. Aquí, mostramos por primera vez un protocolo de LM que demostró ser eficiente para cosechar tipos de tejidos específicos (floema, corteza y epidermis) de segmentos nodales de tallo de olivo y obtener ARN de alta calidad. Esto es importante para futuros estudios transcriptómicos para identificar células competentes para el enraizamiento. Aquí, los segmentos nodales fueron congelados rápidamente en isopentano enfriado con nitrógeno líquido y se realizaron cortes criogénicos. A pesar de la falta de fijadores utilizados para preservar la anatomía de las muestras, las secciones criocortadas mostraron tejidos con alta integridad morfológica, comparable con la obtenida con el método de embebido en parafina. Las células del floema, corteza y epidermis pudieron ser fácilmente distinguidas y cosechadas de manera eficiente mediante LM. El ARN total aislado de estos tejidos exhibió alta calidad, con Números de Calidad de ARN (determinados por un Sistema de Analizador de Fragmentos) que oscilaban entre 8.1 y 9.9. Este trabajo presenta un procedimiento de LM simple, rápido y eficiente para cosechar tipos de tejidos específicos de tallos de olivo y obtener ARN de alta calidad.
Descripción
Las plantas superiores están compuestas por diferentes tipos de tejidos y células. Las células distintas albergan diferentes procesos bioquímicos y fisiológicos, lo que se refleja en las diferencias en los perfiles de expresión génica, niveles de proteínas y metabolitos. Cuando se llevan a cabo estudios ómicos, la información proporcionada por un tipo celular específico puede diluirse y/o enmascararse al utilizar una mezcla de células distintas. Así, los estudios realizados a nivel de tipo celular y de tejido están ganando un interés creciente. La tecnología de microdisección láser (LM) se ha utilizado para aislar tipos específicos de tejidos y células. Sin embargo, esta tecnología enfrenta algunos desafíos dependiendo de la especie de planta y el tipo de tejido bajo análisis. Aquí, mostramos por primera vez un protocolo de LM que demostró ser eficiente para cosechar tipos de tejidos específicos (floema, corteza y epidermis) de segmentos nodales de tallo de olivo y obtener ARN de alta calidad. Esto es importante para futuros estudios transcriptómicos para identificar células competentes para el enraizamiento. Aquí, los segmentos nodales fueron congelados rápidamente en isopentano enfriado con nitrógeno líquido y se realizaron cortes criogénicos. A pesar de la falta de fijadores utilizados para preservar la anatomía de las muestras, las secciones criocortadas mostraron tejidos con alta integridad morfológica, comparable con la obtenida con el método de embebido en parafina. Las células del floema, corteza y epidermis pudieron ser fácilmente distinguidas y cosechadas de manera eficiente mediante LM. El ARN total aislado de estos tejidos exhibió alta calidad, con Números de Calidad de ARN (determinados por un Sistema de Analizador de Fragmentos) que oscilaban entre 8.1 y 9.9. Este trabajo presenta un procedimiento de LM simple, rápido y eficiente para cosechar tipos de tejidos específicos de tallos de olivo y obtener ARN de alta calidad.