Una estrategia que ahorra tiempo para generar mutantes maternos dobles mediante un sistema de knockout condicional específico de oocitos en peces cebra
Autores: Zhang, Chong; Li, Jiaguang; Tarique, Imran; Zhang, Yizhuang; Lu, Tong; Wang, Jiasheng; Chen, Aijun; Wen, Fenfen; Zhang, Zhuoyu; Zhang, Yanjun; Shao, Ming
Idioma: Inglés
Editor: MDPI
Año: 2021
Acceso abierto
Artículo científico
2021
Una estrategia que ahorra tiempo para generar mutantes maternos dobles mediante un sistema de knockout condicional específico de oocitos en peces cebra
Categoría
Ciencias Naturales y Subdisciplinas
Subcategoría
Biología
Palabras clave
Materna
Proteínas
Oogénesis
Embriones
SgARNs
Knockout
Licencia
CC BY-SA – Atribución – Compartir Igual
Consultas: 23
Citaciones: Sin citaciones
Los productos maternos son esos ARNm y proteínas depositados durante la oogénesis, que desempeñan roles críticos en el control de la formación de ovocitos, la fertilización y el desarrollo embrionario temprano. Sin embargo, los estudios de pérdida de función para estos factores maternos aún son escasos, principalmente debido al prolongado período de cribado transgeneracional y las barreras técnicas que impiden la generación de embriones mutantes maternos (M) y maternos y cigóticos (MZ). Mediante la expresión transgénica de múltiples sgARN que apuntan a un solo gen de interés en el contexto de una línea transgénica Tg(:) con expresión específica en ovocitos, hemos obtenido con éxito mutantes maternos o materno-cigóticos para genes individuales en embriones F1. En este trabajo, conectamos en tándem un marcador GFP materno y ocho unidades de expresión de sgARN para apuntar y simultáneamente introdujimos este constructo en el genoma de Tg(:) mediante meganucleasa I-I. Como se esperaba, confirmamos la existencia de embriones M;M con un fuerte movimiento defectuoso de convergencia y extensión durante la gastrulación entre la descendencia F1 positiva para GFP cruzada. Los embriones MZ;MZ también se obtuvieron cruzando la hembra mutante portadora de mosaico F0 con peces machos. Esta prueba de principio destaca así el potencial de esta estrategia de knockout condicional para eludir la dificultad actual en el estudio de genes con múltiples paralogos funcionalmente redundantes.
Descripción
Los productos maternos son esos ARNm y proteínas depositados durante la oogénesis, que desempeñan roles críticos en el control de la formación de ovocitos, la fertilización y el desarrollo embrionario temprano. Sin embargo, los estudios de pérdida de función para estos factores maternos aún son escasos, principalmente debido al prolongado período de cribado transgeneracional y las barreras técnicas que impiden la generación de embriones mutantes maternos (M) y maternos y cigóticos (MZ). Mediante la expresión transgénica de múltiples sgARN que apuntan a un solo gen de interés en el contexto de una línea transgénica Tg(:) con expresión específica en ovocitos, hemos obtenido con éxito mutantes maternos o materno-cigóticos para genes individuales en embriones F1. En este trabajo, conectamos en tándem un marcador GFP materno y ocho unidades de expresión de sgARN para apuntar y simultáneamente introdujimos este constructo en el genoma de Tg(:) mediante meganucleasa I-I. Como se esperaba, confirmamos la existencia de embriones M;M con un fuerte movimiento defectuoso de convergencia y extensión durante la gastrulación entre la descendencia F1 positiva para GFP cruzada. Los embriones MZ;MZ también se obtuvieron cruzando la hembra mutante portadora de mosaico F0 con peces machos. Esta prueba de principio destaca así el potencial de esta estrategia de knockout condicional para eludir la dificultad actual en el estudio de genes con múltiples paralogos funcionalmente redundantes.