El virus de la pseudorrabia (PRV) puede causar enfermedades agudas en cerdos que conducen a pérdidas económicas en todo el mundo y es un posible agente causante de encefalitis viral en humanos. Aunque existen vacunas efectivas, ha surgido un número creciente de variantes en China, y es esencial identificar agentes antivirales efectivos contra el PRV para prevenir infecciones latentes. En este estudio, evaluamos la actividad antiviral de la luteolina contra el PRV in vitro e in vivo. Se encontró que la luteolina inhibía significativamente el PRV a una concentración no citotóxica (70 M), con un IC de 26.24 M y un índice de selectividad de 5.64. La luteolina inhibió el virus en la etapa de replicación y disminuyó la expresión del ARNm viral y de la proteína gB. La luteolina redujo la apoptosis de las células infectadas por PRV, mejoró la tasa de supervivencia de los ratones después de un desafío letal, redujo las cargas virales en el hígado, riñón, corazón, pulmón y cerebro, redujo las lesiones cerebrales y ralentizó las reacciones de inflamación y oxidación. Nuestros resultados mostraron que la luteolina tiene potencial como un nuevo fármaco antiviral alternativo para la infección por PRV.