Para explorar las influencias del acolchado de paja de arroz en la fertilidad del suelo en sistemas agroforestales, se investigaron los contenidos de C y N en el suelo y las actividades enzimáticas en un ecosistema de intersiembra en el sur central de China. En este estudio, se establecieron tres tratamientos de aplicación de acolchado de paja en 2021, a saber, acolchado de polvo de paja (SPM), acolchado de segmentos de paja (SSM) y acolchado sin paja como control (CK). Se recolectaron muestras de suelo de tres profundidades (0-10 cm, 10-20 cm y 20-40 cm) en cada tratamiento el día 90 después de los tratamientos. Se determinaron el carbono orgánico del suelo (SOC), el nitrógeno total (TN), el carbono microbiano (MBC), las actividades enzimáticas del suelo (incluyendo fosfatasa ácida (ACP), ureasa (UE), celulasa (CL) y peroxidasa (POD)), y el contenido de agua en el suelo (SWC). Los resultados mostraron que el SOC aumentó significativamente debido a la aplicación de acolchado en SPM y SSM, en la capa superior del suelo de 0-10 cm en comparación con el CK. El SWC, SOC, TN y MBC aumentaron en un 0.8 y 56.5, 3.5 y 37.5, 21.3 y 61.6, y 5.8% y 76.8% en los tratamientos SPM y SSM en comparación con el CK, respectivamente. Las actividades enzimáticas del suelo de ACP, UE, CE y POD aumentaron significativamente debido al acolchado de paja en comparación con CK en todas las capas del suelo. Las actividades enzimáticas de CL y POD fueron significativamente más altas en SSM que en SPM a lo largo de la profundidad del suelo, excepto para ACP. Las actividades enzimáticas de ACP fueron de 14,190, 12,732 y 6490 U/g en SSM, SPM y control, respectivamente. Esto indicó que la aplicación de acolchado mejoró la actividad enzimática de ACP. El acolchado no tuvo efectos significativos en UE y CL, mientras que el POD disminuyó significativamente en el orden de SPM > SSM > CK en todas las capas del suelo, siendo, en promedio, un 6.64% y un 3.14% más alto en SSM y SPM, respectivamente, en comparación con las parcelas CK. El SOC y MBC fueron los factores clave de nutrientes que afectaron las actividades enzimáticas del suelo en el sitio de estudio. Los resultados de este estudio proporcionaron importantes conocimientos científicos para mejorar las propiedades físico-químicas del suelo durante la gestión del sistema de intersiembra y para el desarrollo de la industria.