La división del trabajo entre las obreras de las abejas melíferas contribuye a actividades de polinización eficientes. Los lípidos desempeñan un papel crucial en la regulación del comportamiento, con el polen sirviendo como fuente principal de estos lípidos. Sin embargo, el efecto regulatorio de los lípidos del polen en la división del trabajo de las obreras de las abejas melíferas aún está por estudiar. En este estudio, se aplicó un análisis lipídomico en profundidad basado en HPLC-QTOF-MS y UPLC-IM-QTOF-MS. Realizamos el primer perfil lipídomico completo del abdomen, cerebro e intestino de abejas emergentes, nodrizas y recolectoras, así como del polen, estableciendo así una biblioteca de lípidos que comprende 646 especies de lípidos. Se encontró que la composición lipídica del polen exhibía características similares a las de las obreras de las abejas melíferas, siendo el ácido alfa linolénico (ALA) validado como un lípido característico clave del trabajo. La suplementación dietética moderada de ALA remodeló los niveles de lípidos y facilitó el metabolismo relacionado con la división del trabajo. Estos hallazgos avanzan en el campo del análisis lipídomico en las obreras de las abejas melíferas, revelando un nuevo regulador del comportamiento y ampliando la comprensión de la regulación nutricional del ALA en la división del trabajo entre las obreras de las abejas melíferas.