Este estudio investiga la biofortificación de selenio (Se) en cuatro cepas del hongo medicinal utilizando sustratos enriquecidos con Se para evaluar la absorción, distribución y su impacto en el rendimiento de Se. Los sustratos experimentales incluyeron materiales lignocelulósicos fortificados con Se (0, 2, 6 y 18 ug/g) en forma de selenito de sodio. La acumulación de Se varió según la cepa, con M9521 mostrando la mayor eficiencia de bioacumulación, especialmente para un compuesto de Se desconocido, lo que sugiere vías metabólicas únicas. Otras cepas acumularon predominantemente selenometionina. El factor de bioconcentración fue más alto a 6 ug/g de Se, lo que indica una eficiencia óptima en este nivel. La suplementación moderada de Se (2-6 ug/g) mejoró el rendimiento, aunque el tiempo de cosecha se vio afectado por los niveles de Se en algunas cepas. La composición del sustrato influyó en la absorción de Se, con el salvado de trigo produciendo el mayor contenido de Se y las cáscaras de soja maximizando la eficiencia biológica. Se observó una fuerte correlación entre C/N y el contenido de Se. La distribución de Se fue mayor en las capas externas del basidiocarpo, y la intensidad lumínica durante el cultivo mejoró la acumulación de Se. La absorción de Se disminuyó con las cosechas posteriores en niveles de suplementación medio y alto, mientras que los sustratos mantuvieron el mismo Se biodisponible. Los resultados resaltan el potencial del Se enriquecido como fuente de alimento funcional y el papel del sustrato y las condiciones de cultivo en la optimización del contenido de Se.